¿Qué es el microscopio de fluorescencia?
El microscopio de fluorescencia ilumina la muestra con luz de longitud de onda corta (UV o azul). Las moléculas fluorescentes —naturales o añadidas como marcadores— absorben esta luz y reemiten luz de longitud de onda mayor, que es lo que vemos como una imagen brillante sobre fondo oscuro.
Funcionamiento
Una fuente de luz UV o azul (lámpara de mercurio, xenón o LED) ilumina la muestra. Filtros específicos seleccionan la longitud de onda exacta de excitación. Las moléculas fluorescentes en la muestra absorben esta luz y reemiten luz de longitud de onda mayor. Un segundo filtro bloquea la luz excitadora pero deja pasar la luz emitida, que es lo que se ve como fluorescencia brillante sobre fondo oscuro.
Aplicaciones típicas
- Localización de proteínas en células (inmunofluorescencia)
- Estudio de orgánulos específicos
- Diagnóstico de enfermedades
- Investigación en biología molecular
Ventajas y limitaciones
| Ventajas | Limitaciones |
|---|---|
| Sensibilidad extrema (puede detectar moléculas individuales). Múltiples colores simultáneos. Permite ver procesos en células vivas. | Muestra debe llevar fluoróforos. La fluorescencia se apaga con el tiempo (fotoblanqueo). Equipo caro. |
Preguntas frecuentes
¿Qué es la fluorescencia en el microscopio?
Es el fenómeno por el que ciertas moléculas absorben luz de una longitud de onda y reemiten luz de longitud de onda mayor (menos energética). El microscopio explota este fenómeno para ver moléculas marcadas con fluoróforos.
¿Qué fluoróforos se usan?
Los más comunes: DAPI (azul, marca ADN), GFP (verde, proteína fluorescente), rodamina (rojo), Alexa Fluor (varios colores).
¿Es lo mismo microscopio de fluorescencia que confocal?
No. El confocal es una mejora del de fluorescencia: añade un pinhole y un láser para eliminar la luz fuera de foco. Más sobre confocal.